原代細胞培養過程是怎麼樣的
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原代細胞是指從機體取出後立即培養的細胞。一般情況下,常把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱爲原代細胞培養。原代細胞培養需經過準備、處理、剪切、消化分離、計數、培養這幾個階段。具體說明如下:
1、準備:取各種已消毒的培養用品置於淨化檯面,進行操作前的洗手、消毒。
2、處理:點燃酒精燈,把組織塊置於燒杯中,用Hanks液漂洗2-3次,去除血污。
3、剪切:用手術刀將組織切成若干小塊,加入比組織塊總量多30-50倍的胰蛋白酶液,然後一併倒入三角燒瓶中,結紮瓶口或塞以膠塞。
4、消化分離:將三角燒瓶置於用恆溫水浴,每隔20分鐘搖動一次,在消化過程中發現消化液混濁時,可在鏡下觀察,如果組織已分散成細胞團或單個細胞,立即終止消化,進行低速分離後加入適量含有血清的培養液。
5、計數:用計數板計數,對大多數細胞來說,pH需要控制在7.2-7.4範圍內。
6、培養:置於37℃的CO2溫箱培養,瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,紗布棉塞易生黴菌,每次換液時需要換新塞。
注意,原代細胞的培養得保證無菌環境,並且細胞生長所需要的營養成分得充足。
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